采血管含有的成分，密度梯度离心也有三种方法
抗体亲和力成熟柠檬酸钠CPT管采血的细胞分离柠檬酸钠是一种抗凝剂：柠檬酸根可与血液中的钙离子结合，生成可溶解性的络合物。由于钙离子在凝血过程中起到促进凝血作用，因此血液中的钙离子浓度下降会阻止血液的凝结。
步骤：
1. 室温(15℃—— 30℃)竖直存放血浆收集管，直到离心。
2. 离心前将试管轻轻倒转8 - 10次，使细胞重新混合。
3. 将离心管置于水平转子中，室温(15℃——30℃)，1800 x g (RCF)离心30分钟。转速必须仔细计算。降速过程中不要使用刹车。应注意确保CPT管是正确地安装在离心机中。
4. 在离心机完全停止后，小心地取出试管并放置在一个架子上。
5. 单个核细胞和血小板位于血浆层下方的白色层中(见图1)。
6. 在不干扰细胞层的情况下，从每根CPT管中抽取血浆层。如果方案要求收集血浆，请参阅方案的具体文件。
7. 用移液管从每个试管中收集单个核细胞层，并将其转移到50mL带帽的塑料锥形离心管。
8. 如果收集3根或更少(≤3根)CPT管，将全部CPT管收集到的细胞层放入一个50mL离心管。
9. 如果收集的CPT管多于3根(>3)，则取其中2 - 3根CPT管的细胞层放入一个50mL离心管。不要将三个以上CPT管的细胞层组合在一起放入一个50mL离心管。重复此步骤，直到将所有CPT管的细胞层转移到50mL离心管中，然后进行洗涤步骤。
图1 密度梯度离心1+卡梅德生物.png
图1 CPT管离心结果
带有预填充 Frit 屏障的ACD、NaHep或EDTA管采集血液的细胞分离
在加入血液之前，目视检查CSTFB，看是否有液体在 Frit上面。如果 Frit上面有液体，将CSTFB在1000 x g下离心30秒。如果有密度梯度离心后溶液仍在 Frit上方，应吸除。
步骤：
1. 血液稀释用于CSTFB分离
血液与生理盐水的最大比例约为2:1。每10 —— 20mL全血使用一个50mL管(或每5 —— 10mL全血用一个12 —— 14mL管)。按要求使用尽可能多的CSTFB来分配每个样品的所有血液。
(1) 在每个CSTFB上标上样品识别号。
(2) 用无菌吸管向每个CSTFB中加入生理盐水溶液：50mL CSTFB管加5mL生理盐水。
(3) 轻轻混合全血，然后用无菌移液器将血液转移到标记的CSTFB中。
(4) 使用无菌移液器，用生理盐水冲洗每个原始抗凝血管并转移溶液冲洗量到CSTFB，确保不超过总管体积(生理盐水+全血)的限制：50mL管的总体积不应超过30mL。
(5) 小心盖上CSTFB。
2. CSTFB密度离心和PBMC收集
(1) 保持试管直立，轻轻转移到离心机上。
(2) 800 —— 1000 x g, 15℃—— 30℃离心15分钟，关闭刹车。(一些样品在1000g离心PBMC分离的效果可以改善。如果降速过程中存在刹车，就会破坏分层。)
(3) 离心时，准备新无菌离心管；这将与上一步中使用的管子数量相同。用样品识别号标记每个试管。
(4) 轻轻将CSTFB从离心机中取出，以免扰乱各层。
(5) 离心使试管（包括 Frit层）的内容物分成六个不同的层。
(6) 检查管里是否有以下可能的问题。根据实验室要求记录观察结果和采取的后续行动。
①、血浆+生理盐水溶液层。
②、离心后在 Frit上可见凝块。
③、由于离心速度，时间或制动错误，PBMC层较差。PBMC层小而模糊，血浆+生理盐水层可能略有混浊。
④、由于红细胞计数或红细胞比容低，在 Frit上形成PBMC层。
(7) 每个样品使用新的无菌移液管去除上层淡黄色血浆+盐水溶液的组分，至云状白色PBMC带（位于血浆+盐溶液层界面和透明分离介质溶液间）的上方约1——2厘米的位置。根据实验室政策，丢弃血浆+生理盐水溶液的组分。（或者，上层血浆+盐水溶液部分可以保留。而浑浊的白色PBMC带可通过上层小心插入移液器移至PBMC带。）
(8) 使用无菌血清学移液器收集上述PBMC带处的所有细胞。注意不要吸入多于必要的分离介质溶液。
(9) 将收集到的细胞从一个CSTFB转移到一个相应的、预标记的无菌离心管。管子可以预先添加盐水溶液以节省时间（50mL管加25mL生理盐水溶液）。之后进行洗涤步骤。
(10) 将含有剩余的红细胞和分离介质CSTFB重新盖上盖子。按照实验室政策，将CSTFB作为生物危害废物丢弃。
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