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灌流细胞培养选择合适二抗考虑方面
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灌流细胞培养选择合适二抗考虑方面
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ningxueqin
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发表于 2024-5-18 14:31:01
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灌流细胞培养
二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体,上通常连有酶或荧光素等标签。由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以广泛应用,如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗针对某一特定物种的所有抗体均具有特异性,因而使用特定标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记,大大节省了时间和费用;此外,一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子,从而使信号大大增强,提高了实验灵敏度。
二抗,广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体。检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求,一般来说,选择合适的二抗需要从以下几个方面考虑:
1.一抗的种属来源
根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。例如:一抗是小鼠源的单克抗体,二抗则选抗小鼠的二抗(山羊抗小鼠或兔抗小鼠等)。
2.一抗的类别亚型
二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白,因此相应的二抗就是抗IgG抗体。单克隆抗体的类别及亚型通常会在
产品
说明书中有描述,如果一抗是小鼠IgM,那么相应的二抗就应当是抗IgM。如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚型(IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3),那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合,或者你也可以选择专门针对这一亚型的二抗。此种抗体在双标记实验中尤其合适。
3.二抗的藕联标记
一般来讲,藕联到二抗上的探针主要有酶(辣根过氧化酶HRP)、荧光基团、生物素、金颗粒。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。WB和ELISA常用的二抗是酶标二抗,而免疫荧光实验中通常使用荧光基团标记的二抗,而金颗粒标记的二抗则更多的应用于免疫电镜中。
写在最后:抗体广泛应用于各种科研领域,且价格不菲。谨慎选择质量可靠,适用的抗体能够有效避免科研时间及成本的浪费,不要因为贪图便宜,选择了一些“平价替代"产品,其质量及售后,无法有效保证。
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